1.研究背景与目的：

中药在治疗多种疾病中发挥重要作用，但中药中具有药理活性的成分大多未明。

传统筛选活性成分的方法耗时耗力，且成本高昂。

本研究旨在建立一种敏感、高效、便捷的方法，用于从中药复杂提取物中筛选针对TNF-R1的活性成分。

2.研究方法：

SPR生物传感器筛选：利用SPR生物传感器实时监测化合物与固定在传感器表面的TNF-R1之间的相互作用。

样品制备：选取五种已知具有潜在抗炎活性的中药（大黄、丹参、大青叶、甘草、黄芪），制备其提取物。

浓度调整：通过HPLC分析调整各提取物浓度，确保在SPR筛选中具有可比性。

活性成分回收与鉴定：从与TNF-R1结合的成分中回收样品，通过UPLC-QTOF/MS进行鉴定。

3.实验步骤：

TNF-R1固定：通过胺耦合方法将TNF-R1固定在CM5传感器芯片表面。

SPR筛选：将调整浓度后的中药提取物注入SPR系统，监测与TNF-R1的结合情况。

活性成分回收：通过注射和回收程序从传感器表面回收与TNF-R1结合的成分。

UPLC-QTOF/MS分析：对回收的样品进行UPLC-QTOF/MS分析，鉴定活性成分。

药理实验：在L929细胞中验证PMG的抗炎活性。

4.实验结果

活性成分识别：在大黄提取物中发现显著的响应信号，进一步分析鉴定出physcion-8-O-β-D-monoglucoside（PMG）为活性成分。

亲和力测定：SPR亲和力分析显示PMG与TNF-R1的亲和力常数为376nM，表明PMG是TNF-R1的强效配体。

药理活性验证：PMG在L929细胞中抑制TNF-α诱导的细胞毒性和凋亡，验证了其抗炎活性。

5.技术优势：

SPR生物传感器的优势：高灵敏度、高分辨率和特异性，能够实时监测配体-受体相互作用。

联用技术的优势：SPR与UPLC-MS联用，克服了SPR无法提供结构信息的局限，实现了从复杂混合物中直接筛选并鉴定活性成分。

高效筛选：该方法能够高效筛选出微量但具有强亲和力的活性成分，提高了筛选效率。

6.结论与意义：

本研究成功建立了一种基于SPR和UPLC-MS联用技术的高效筛选方法，用于从中药复杂提取物中筛选并鉴定TNF-R1的活性配体。

PMG作为新发现的TNF-R1配体，具有显著的抗炎活性，为中药现代化研究提供了新思路。

该方法具有广泛的应用前景，可用于分析中药及其他复杂药物系统中的活性成分。

这份文件详细阐述了使用SPR和UPLC-MS联用技术从中药中筛选并鉴定TNF-R1活性配体的全过程，展示了该方法在中药现代化研究中的潜力和应用价值。

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