近日，国际药理学期刊《Phytomedicine》（IF=7.9）发表了一项突破性研究《Sanguinarine suppresses oral squamous cell carcinoma progression by targeting the PKM2/TFEB axis to inhibit autophagic flux》。该研究由中南大学湘雅二医院、上海交通大学医学院附属第九人民医院等七家单位联合完成，首次揭示天然化合物血根碱（Sang）通过靶向PKM2蛋白抑制自噬流，从而阻断口腔鳞癌（OSCC）进展的全新机制。研究中的表面等离子共振（SPR）和有限蛋白酶解质谱联用（LIP-MS）技术成为锁定药物靶点的关键利器，为天然药物靶点鉴定提供了教科书级范本。

研究背景与意义：天然药物的靶点困局

口腔鳞癌（OSCC）占头颈部肿瘤的40%，五年生存率不足50%。Sang作为罂粟科植物提取物，虽被证实具有显著抗癌活性，但其作用靶点长期不明，制约了临床转化。传统靶点筛选方法存在假阳性率高、无法区分直接/间接作用等局限，而本研究通过SPR与LIP-MS的联用，首次精准捕获Sang的直接靶点——丙酮酸激酶（PKM2），为"老药新用"提供机制基础。

LIP-MS技术：从千种蛋白中锁定真凶

【实验设计】研究团队采用创新性LIP-MS技术：将CAL27细胞裂解液分为4组（对照组+3个Sang浓度组），加入蛋白酶K进行有限酶解。药物结合的靶蛋白因空间位阻抵抗酶切，导致其肽段丰度/序列区别于对照组。

【技术优势】与传统方法相比，LIP-MS具备三大突破：

1）在天然细胞环境中捕获靶点；

2）无需化学标记避免结构干扰；

3）可筛选未知结合位点的靶蛋白。

【关键发现】质谱数据分析显示，6个蛋白在Sang处理后显著抗酶解，其中PKM2在三个浓度组均被富集，提示其为高亲和力靶点。

SPR技术：毫秒级精准量化药物-靶标互作

【实验设计】为验证LIP-MS结果，团队采用SPR技术：将PKM2蛋白固化于CM5芯片表面，使不同浓度Sang（0.625-10 μM）流过芯片，通过实时监测折射率变化生成传感图谱。

【技术优势】SPR的实时检测特性，可精准获取结合动力学参数：1）结合速率常数（k_a）；2）解离速率常数（k_d）；3）平衡解离常数（K_D）。

【关键发现】传感图谱显示典型"浓度依赖型"结合曲线，证实Sang与PKM2存在强效特异性结合。

双技术联用：多维验证靶点可靠性

研究通过三重互证策略确保靶点真实性：

1.虚拟筛选交叉验证：GalaxySagittarius算法预测PKM2为Sang潜在靶点（对接评分-24.713，排名第5）；

2.独立技术佐证：MST（微量热泳动）检测到相同K_D值；

3.功能位点锁定：分子对接发现Sang结合于PKM2的F26位点，突变该位点（F26A）后结合能力消失。

技术启示：为何选择SPR与LIP-MS？

本研究成功凸显两大核心技术的独特价值：

LIP-MS优势：适用于复杂基质中未知靶点的全局性筛选，避免传统pull-down技术的假阳性问题；

SPR优势：提供实时动力学参数，适用于药物-靶标亲和力精准评价及先导化合物优化；

联用价值：LIP-MS广撒网初筛靶点 + SPR深验证量化互作，形成靶点研究的"黄金闭环"。

Peng YC, He ZJ, Yin LC, et al. Sanguinarine suppresses oral squamous cell carcinoma progression by targeting the PKM2/TFEB aix to inhibit autophagic flux.Phytomedicine. 2025;136:156337. doi:10.1016/j.phymed.2024.156337

研锦生物可以利用基于靶点或小分子结构的药物设计方法，对可购买化合物、天然产物等数据库进行虚拟筛选，并获得潜在活性的化合物列表供进一步活性实验确证。面向制药企业和科研院所，可提供一站式的早期药物研发服务，包括虚拟药物筛选、先导优化、靶标预测、 动力学模拟等，涉及小分子化学药、生物药、中药等多种新药类型，为您提供优质的药物发现服务