PF是过特异性NLRP3/GSDMD信号通路发挥的重要作用
2024年9月3日，成都中医药大学药学院马骁教授团队在Phytomedicine上发表了题为“Paeoniflorin inhibited GSDMD to alleviate ANIT-induced cholestasis via pyroptosis signaling pathway”的文章，揭示芍药苷（PF）靶向GSDMD通过NLRP3依赖性焦亡途径和随后的炎症介质释放，减轻胆汁淤积。
芍药苷（Paeoniflorin， PF）是一种从芍药中提取的生物活性化合物，对多种肝脏疾病具有显著的保护作用。PF不仅促进胆汁酸分泌，还能增强胆汁酸的转运和代谢。在这些发现的基础上，进一步阐明了PF在调节NLRP3炎性体中的作用，特别是减轻抗炎药诱导的胆汁淤积。本研究旨在探讨PF是否通过特异性NLRP3/GSDMD信号通路发挥其保肝和降胆作用，并确定其潜在的治疗靶点。
研究方法
使用SD大鼠和HepG2细胞建立ANIT诱导的胆汁淤积模型（CT）。
通过苏木精-伊红（HE）染色评估肝脏组织病理学改变。
CT治疗中潜在的PF靶点
采用血清生化分析、酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光（IF）、免疫组化（IHC）、Western blotting、透射电子显微镜（TEM）和扫描电子显微镜（SEM）等方法。
使用HuProt™ 20K Chip筛选PF的潜在结合靶点。
通过分子对接（MD）、分子动力学模拟（MDS）、细胞热移位试验（CETSA）和表面等离子体共振（SPR）等技术验证PF与靶点的结合。
（SPR检测KD值为12.3 μM。PF具有直接结合GSDMD蛋白的能力。采用MD和MDS等综合技术，确定了PF与GSDMD的特异性结合方式。此外，CETSA和SPR技术显示PF与GSDMD具有高亲和力，为PF的直接靶向作用提供了一致的证据。）
研究结果
PF给药可减轻ANIT诱导的肝脏病理变化，提高肝功能指标，并改善细胞存活率。
网络药理学和焦亡抑制剂研究表明，PF可能通过NLRP3依赖的焦亡通路缓解CT。Western blotting、IF和IHC分析进一步支持了PF抑制NLRP3依赖焦亡的潜力。
通过HuProt™ 20K Chip筛选，确定GSDMD为PF的靶点。MD、MDS、CETSA和SPR技术验证了PF与GSDMD的结合亲和力。
ELISA和IHC结果显示，PF通过抑制GSDMD，减少了下游炎症因子的释放。
结论
PF主要通过靶向GSDMD，抑制ANIT诱导的焦亡及随后炎症介质的释放。
spr方法描述
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