药物亲和反应的靶点稳定性（drug affinity responsive target stability，DARTS）

在生理条件下，蛋白质处于动态平衡状态，具有多种替代构象，还可能表现出一定程度的局部可逆展开。当特定配体（如药物）结合时，由于蛋白质和药物配体之间形成的疏水、氢键或静电相互作用导致自由能变化，平衡将转向高度有利于配体结合的构象，这导致了热力学上更稳定的状态。在这种状态下，目标蛋白的构象变化显著减少，对变性和蛋白酶水解的抵抗力显著增强。

DARTS的基本原理是小分子配体与靶蛋白结合后可以稳定靶蛋白，增强其对蛋白水解酶水解作用的抗性，如图所示。蛋白与小分子药物结合后，对亲和反应后的混合蛋白进行酶水解，酶解产物经凝胶电泳分离后，与空白组比较，与药物结合的蛋白片段增多，如图所示。

图. DARTS的基本原理

DARTS的基本步骤如下：

（1）蛋白质库的制备；

（2）蛋白质和小分子的孵育；

（3）蛋白酶水解；

（4）通过考马斯亮蓝，银染，免疫印迹等方法检测对照组和加药组蛋白差异；

（5）目标蛋白质凝胶带的收集；

（6）通过质谱等方法对目标蛋白质鉴定；

（7）通过平行实验对靶点进行验证，

DARTS的优势主要有以下三点：

（1）应用于大多数天然的、无需修饰的小分子；

（2）不需要大量的纯蛋白，模式生物的表型特征不受限制，蛋白质样品可以从细胞系或组织的有机体中获得；

（3）可以用于寻找化合物新的靶点，也可以从成分复杂的天然药物和复方药物中发现新的靶点。

如上所述，DARTS技术操作简单，然而仍存在一些局限性，一方面，由于蛋白质库的复杂性，小分子药物与蛋白质之间可能存在一些错误结合；另一方面，在SDS-PAGE和LC-MS分析中，一些低丰度蛋白质的阳性结果容易被忽略；此外，一些错误操作也可能导致假阳性结果，因此，需要通过其他实验方法验证DARTS的实验结果。

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